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Protokoll Biochemie, Teil B

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Lab Report
Biology

University, School

Karl-Franzens-Universität Graz - KFU

Grade, Teacher, Year

1, (mehrere), 2013

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Protokoll Teil B

LU Biochemische Übungen

Christopher Ludwig

C. R.

24. – 25.4.2013


MOL.405, Sommersemester 2013 222220202013


  1. Aufnahme des UV-Spektrums von NAD+ und NADH

    1. Ziel

Ziel des Versuchs war die Aufnahme des UV-Spektrums von NAD+ und NADH sowie die Berechnung des molaren Extinkionskoeffizienten von NADH bei 340nm.

    1. Durchführung

1.2.1) Material:

5*10-5M NAD+ (MW: 663,4 g/mol) in H2O (200ml) wurde anhand folgender Überlegung hergestellt:

5*10-5M NADH (MW: 709,4 g/mol) in H2O (200ml)(Berechnung siehe NAD)

1.2.2) Methoden

Das Beispiel wurde gemäß der Vorschrift „Biochemische Übungen – Praktikum, LU, 8 STD.“ (S.32-52) vom Sommersemester 2013 durchgeführt.


Die Aufnahme der Absorptionsspektren erfolgte zwischen 220 und 400nm im Zweistrahl-Spektralphotometer U-2900 gegen H2O.

Die Messung erfolgt in Quarzküvetten.

    1. Resultate

NAD+ wies ein Absorptionsmaximum bei einer Wellenlänge von 258,6nm auf. Die Absorptionsmaxima von NADH lagen bei 339,2 und bei 258,6nm


Tabelle B1: Resultate der Absorptionsspektren von NAD+ und NADH


c [mol/l]

ABS260

260[L·mol−1·cm−1]

ABS340

340[L·mol−1·cm−1]

NAD+

5*10-5M

0,685

13700

-

-

NADH

5*10-5M

0,607

12140

0,248

4960

Der molare Extinktionskoeffizient für 340nm wurde durch Umformung des Lambert Beer´schen Gesetzes berechnet:

    1. Diskussion

NAD+ als auch NADH hatten die ihre Absorptionsmaxima nahe den Literaturwerten von 260 bzw. 260 und 340nm.

Die Abweichung des molaren Extinktionskoeffizienten vom Literaturwert (6220) kommt möglicherweise durch fehlerhafte Verdünnungen, da die Methode mit dem Auffüllen auf 200ml im Becherglas nicht ganz exakt ist, zustande. Weiters könnten auch Pipettierfehler passiert sein, beziehungsweise könnte auch eine schlechte Durchmischung der Grund für diesen niedrigen Wert sein.

Die Quarzküvetten wurden deshalb verwendet, da Kunststoffküvetten im UV-Bereich das Licht absorbieren würden, was natürlich zu einer Verfälschung der Ergebnisse führen würde.

  1. Bestimmung der ADH-Aktivität bzw. der Ethanol-Konzentration

    1. Ziel

In ausgegebenen Proben sollte mittels optischen Tests die Aktivität der Alkoholdehydrogenase, sowie (in der zweiten Probe) die Konzentration des darin enthaltenen .....[read full text]

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    1. 8∞+≤+†ü++∞≈⊥

2.2.1) 4∋†∞+;∋†:

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1,5 4 9†+∋≈+†: 89 µ† 96% 9†+∋≈+† (≤=16,8 ∋+†/† 22=

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8;∞≈∞ 3∞≈†;∋∋∞≈⊥ ≠∞+⊇∞ ≈∞+ ∞;≈∋∋† ⊇∞+≤+⊥∞†ü++†.

    1. 5∞≈∞††∋†∞

2.3.1) 3∞≈†;∋∋∞≈⊥ ⊇∞+ ∞≈=+∋∋†;≈≤+∞≈ 4∂†;=;†ä† ∞;≈∞+ 488-7ö≈∞≈⊥

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10/∋†

1

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0,422

0,13

1567,

2

0,035

0,41

0,125

1507

3

0,028

0,409

0,127

1531

4;††∞†≠∞+†



0,1273

1535

37433




30


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2.3.2) Bestimmung einer Ethanol-Probe unbekannter Konzentration

Die Absorption begann zum Zeitpunkt 0 bei Null und stieg im Laufe der Umsetzung des Ethanol zu Acetaldehyd und Essigsäure auf 0,581, wobei dieser Wert 12 min nach Reaktionsstart erreicht wurde und dann bis zum Ende der Aufzeichnungen nach 20 min konstant blieb.

Für ΔE wurde also 0,581 angenommen.

Die Ethanolkonzentration konnte nun folgende.....

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3.2.2) 4∞†++⊇∞≈

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8;∞ 4∞≈≈∞≈⊥ ≠∞+⊇∞ 3∋∋† ∋∋ 3⊥∞∂†+∋†⊥++†+∋∞†∞+ 0-2900 ⊇∞+≤+⊥∞†ü++†.

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